原代細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)操作步驟

原代細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)操作步驟

1、選用生長情況好，數(shù)量較多的原代細(xì)胞，凍存前一天換液一次。

2、貼壁細(xì)胞需用0.25%胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來，將細(xì)胞懸液收集至離心管中。

3、1000rpm離心5分鐘，棄上清液。

4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液，計(jì)數(shù)，調(diào)整至(1-10)×106 /ml。

5、將懸液分至凍存管中，每管1 ml。

6、密封凍存管，封口一定要嚴(yán)，否則復(fù)蘇時易出現(xiàn)爆裂。

7、用記號筆標(biāo)明細(xì)胞種類，凍存日期。

8、按下列順序降溫：室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃guoye)→液氮。