Hoechst染色方法實驗步驟

1） 取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用細胞培養PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養過夜，使約為50%-80%滿。

2） 刺激細胞發生凋亡后，吸盡培養液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。

3） 去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。

4） 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動數次。

5） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

6） 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。

7） 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

2. 懸浮細胞

1） 離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。

2） 離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動晃動。

3） zui后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。

4） 稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。

5） 均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。

6） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

7） 滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

8） H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

3. 組織切片

1） 常規包埋切片后，脫蠟，透明。

2） PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數次。可在六孔板中操作。

3） 加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動。

4） 用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。

5） 將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。

6） 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

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