在實際操作中，凍存細胞要進行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。凍存細胞應(yīng)如何復(fù)蘇呢？復(fù)蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。
細胞復(fù)蘇的主要操作步驟
（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。
（2）迅速放入 38℃水浴中，并不時搖動，在 1 分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌下取出細胞。
（3）在 1000r/min速度下離心 5～10 分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度 1×109/L，置 37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日 更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細胞密度較高，及時傳代。或無需離心直接將細胞加入瓶中，并加入培養(yǎng)基貼壁培養(yǎng) 12～24 小時 后，充去上清，換入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞復(fù)蘇的注意事項
在細胞復(fù)蘇操作時，應(yīng)注意融化凍存細胞速度要快，可不時搖動安瓿或冷凍管，使之盡快通過易受損的溫度段（-5～0℃）。這樣復(fù)蘇的凍 存細胞存活率高，生長及形態(tài)良好。然而，由于凍存的細胞還受其他因素的影響，有時也會有部分細胞死亡。此時，可將不貼壁、飄浮在培養(yǎng)液上（已死亡）的細胞輕輕倒掉，再補以適量的新培養(yǎng)液，也會獲得較為滿意的結(jié)果。
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